- 慢病毒或逆转录病毒感染细胞中，Polybrene的作用是什么？>>>
Polybrene是常用的助转剂。它是一种带正电的小分子，与细胞表面的阴离子结合，能显著提高感染效率。但Polybrene有一定的细胞毒性，有的细胞对polybrene的毒理反应明显，因此比较敏感或容易分化的细胞都不能用Polybrene。polybrene最常用的工作浓度为4～8μg/ml。
- EGFP/RFP是否能用于活体成像？>>>
可以用，但是EGFP/RFP等生物荧光背景太高，灵敏度低。虽然RFP的穿透性较EGFP强，但高分文章还是建议用Luciferase。
- RAW264.7转染效率低怎么办？>>>
- raw264.7是小鼠腹腔巨噬细胞细胞系,也是常用的炎症细胞模型之一。其难培养、难转染、易分化的特点，至今让很多科研人员头疼。实际上像这类型的细胞，只有选择了恰当的病毒载体，转染效率都能达到80%以上，满足大部分实验需要。
- rescue实验怎么设计？>>>
- rescue实验，也就是常说的回复实验，有表型上的rescue实验，但更多地是机制上的rescue。具体一点也就是说，假设已经做了X基因的干扰实验，造成Y基因下调，原信号通路的被抑制。editor说不严谨，需要做一个rescue的实验。那么就需要过表达X基因，回复X基因的干扰的影响，从而造成Y基因上调，原信号通路的激活。
- microRNA的一般研究思路是什么？>>>
1. 芯片筛选出可能跟功能表型相关的microRNA
2.QPCR验证芯片结果，选择感兴趣的microRNA
3.过表达、抑制感兴趣的microRNA
4.寻找microRNA的靶基因
5.luciferase双荧光素酶靶基因验证
6.rescue回复实验
- 如果要在同一个载体上表达两个基因，应该怎么设计载体？>>>
- 想要将两个蛋白表达在一个载体上，除了选择Promoter A——gene X——Promoter B——gene Y这样的结构外，还可以用2A或者IRES来连接两个目的蛋白，达到共同表达两个蛋白的实验目的。当然，如果基因太大，则最好是分开成两个载体。
- 病毒产品的安全性如何？>>>
使用病毒载体的危险性主要有以下几个考虑因素：
1)是否能重组产生致病性病毒;
2)是否具备复制能力;
3)是否能整合，并导致癌基因激活或者抑癌基因失活;
4)免疫原性。
我们所使用的病毒载体，全部经过改造，去除了致病性元件和复制功能区，因此重组产生功能性病毒的概率极低。虽然慢病毒具有整合能力，但是我们去除了其3’LTR内的激活元件，排除了其激活下游基因的能力。因此，这些病毒载体用于体外和动物实验，对使用者而言都具有极高的安全性。尽管如此，我们建议，使用病毒载体进行细胞或动物实验时，需要遵循标准废弃病毒载体操作流程。
一部分病毒(腺病毒和腺相关病毒载体)，其整合几率低，因此安全性高。有的病毒载体，比如腺相关病毒载体，目前被认为是安全性非常高的一类基因治疗载体，应用前景非常乐观。
- 什么情况下应该选用腺病毒载体？>>>
- 细胞实验中难转染的细胞，如贴壁不好的细胞，原代细胞，或者体内动物实验。
- 不同组织适合那些血清型的腺相关病毒？>>>
AAV2/1 肌肉，心脏，骨骼肌（包括心肌），神经组织
AAV2/2 中枢神经，肌肉，肝脏，脑组织，眼，
AAV2/3 肌肉，肝脏，肺，眼
AAV2/4 中枢神经，肌肉，眼，脑
AAV2/5 肺，眼，中枢神经，关节滑膜，胰腺
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AAV2/8 肝脏，眼，中枢神经，肌肉
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AAV2/DJ 肝脏，视网膜，肺，肾脏
AAV2/DJ/8 肝脏，眼，中枢神经，肌肉
AAV2/Rh10 肺, 心脏，肌肉，中枢神经，肝脏
