MicroRNA靶基因验证

MicroRNA主要通过作用于靶基因的 3’UTR 起作用，可以通过相关软件和网站进行靶点预测。预测到靶点之后，将目的基因 3’UTR 区域构建至psicheck2载体中，通过比较野生型UTR和突变体UTR载体中报告基因表达的改变（监测萤光素酶活性的变化），可以定量反映 miRNA 对目的基因的结合作用，也即用荧光值来判断miRNA是否和靶基因结合。

纽赫生物推出“MicroRNA靶基因验证服务”，为客户寻找或验证microRNA的靶基因。

实验流程如下：

1.    构建靶基因3’UTR报告载体、含突变靶点的3’UTR报告载体。

2.    将miRNA mimics、NC mimics与靶基因3’UTR报告质粒共转染至293T工具细胞中。

3.    检测荧光素酶活性，确定目的microRNA和目的基因之间的关系。

4.    构建含突变靶位点的荧光素酶报告基因载体。

5.    处理数据

图1. psicheck2质粒图谱，用于构建靶基因3’UTR报告载体、含突变靶点的3’UTR报告载体

图2. 双荧光素酶报告系统检测mmu-miR-1a-3p与X-gene之间的相互作用

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